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更新时间:2023-04-18
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1.简介
DEAE SepFast 6HF Plus是弱阴离子交换介质。结合容量和结合动力学高于IEX SepFast 6HF系列。该离子交换层析介质特别适用于需要增加结合能力的生物分子的一般大规模纯化。
DEAE SepFast 6HF Plus在配体密度、负载量和单个组分的分离能力之间进行了平衡设计,适用于大规模生物制造应用。
DEAE SepFast 6HF Plus的基质由高度交联的 6%琼脂糖和葡聚糖制成,具有优异的流动性。它对生物加工行业中遇到的大多数化学条件都非常稳定。
2.产品特性
表1 DEAE SepFast 6HF Plus的特性
DEAE SepFast 6HF Plus | |
基质 | 高度交联的6%琼脂糖接枝葡聚糖 |
功能配体 | 二乙氨基乙基弱阴离子 |
总离子容量 | 0.08-0.13 mmol/ml |
动态结合容量* | >130 mg BSA/ml |
粒径 | 50 - 150 µm |
压力-流速特性** | >500 cm/hr at 3 bar |
操作压力 | Up to 3 bar |
pH稳定性 | 2-14 (短期),3-12 (长期) |
工作温度 | 4℃-30℃ |
化学稳定性 | 所有常用的缓冲液;1 M乙酸、1 M NaOH、6 M盐酸胍、8 M 尿素、30% 异丙醇、70% 乙醇 |
注意事项 | 避免氧化剂和阴离子洗涤剂 |
保存 | 20%乙醇 |
*测试条件:10 mM缓冲液 pH 7.5,上样5 mg/ml 蛋白质,停留时间5分钟,50%穿透。
**在 32 mm内径色谱柱中,床高 15 cm,室温下用水测量。

图1 IEX SepFast Media的压力-流动特性
(备注:将基础基质填充到32 mm内径的柱子中,最终床⾼为15 cm。流动相是去离子水。测试在室温下进行)

图2 滴定曲线
3.方法优化
建议在载量、流速、结合pH值、结合离子强度、洗脱速度和梯度等参数之间进行筛选。由于DEAE SepFast 6HF Plus的快速孔隙可及性,结合步骤可以在比洗脱步骤更快的流速下完成。建议特别注意优化洗脱条件以获得最佳分离能力。
强离子交换介质可以在较宽的pH范围内保持其电荷(并因此保持其功能),而弱离子交换介质的离解程度和离子交换容量随pH值而变化。因此,如果使用弱离子交换介质,优化pH值更为关键。
通常,在优化方法时,平衡组分分离度与工艺产量是主要考虑因素。此外,对于不稳定或对